Antecedentes y objetivos: Se considera que las células que expresan el marcador CD133+ son una población de células progenitoras (CP) y células madre hematopoyéticas inmaduras con capacidad de diferenciación en células endoteliales. El objetivo del estudio fue analizar las características fenotípicas y funcionales de las CP CD133+ seleccionadas de pacientes con enfermedad coronaria avanzada.
Métodos: Subestudio del ensayo PROGENITOR que evalúa la seguridad y eficacia de la inyección transendocárdica de CP endoteliales autólogas CD 133 para angiogénesis terapéutica en pts con angina refractaria. Las CP CD133+ se aislaron en sangre periférica mediante movilizaron con G-CSF (5 ug/kg/12h) durante 4 días, se recogió la fracción mononuclear mediante aféresis y se realizó una selección positiva inmunomagnética con el sistema CliniMacs. Las características fenotípicas de las CP CD133 aisladas se evaluaron por citometría de flujo con los siguientes marcadores: CD45FITC, CD133PE, CD34PC7. La funcionalidad se valoró cuantificando el número de unidades formadoras de colonias (UFC) tras cultivo durante 7 días sobre placas de fibronectina, y se realizó un ensayo de proliferación (P) con un kit de ELISA de incorporación de DNA (Amersham) y de apóptosis (A) con un kit de ELISA de fragmentación de DNA (Roche). Se estudió la capacidad de formar microtúbulos con Matrigel y se analizó la expresión de la enzima aldehidodeshidrogenasa (ALDH) mediante el kit comercial (ALDEFLUOR).
Resultados: Hasta la fecha se han analizado 7 pacientes. Las características fenotípicas de la fracción CD133+ aislada fueron (media ± DE): CD45 baja intensidad 99,95 ± 0,11%; CD133+ 82,42 ± 10,3%; CD34+ 82,5 ± 10,3%; CD133+CD34+ 80,9 ± 10,9%; y CD133+CD34- 0,04 ± 0,04%. El número de UFC (media ± DS) fue 19,9 ± 20,05 para 500.000 células cultivadas. La tasa de P con respecto a la fracción mononuclear fue 0,86 y la de A: 0,98 para 125.000 células cultivadas. Se observó una alta expresión de la enzima ALDH > 80% y se demostró la capacidad de estas células de formar microtúbulos.
Conclusiones: Tras la selección inmunomagnética CD133+ de la fracción mononuclear de la sangre periférica se observó un alto porcentaje de células CD133+. Además esta fracción enriquecida es funcionalmente activa y posee potencial vasculogénico. Se presentarán en el congreso los resultados con un mayor número de pacientes.